Сравнительный анализ методов экстракции вируса гриппа птиц из сырого коровьего молока

В статье представлены данные эпизоотической ситуации по гриппу птиц (ГП) в России и в мире для общей оценки рисков возникновения вспышек ГП у КРС на территории России, а также результаты проверки эффективности методов выделения РНК-вируса из молока для молекулярной диагностики. Отмечена тенденция глобального роста числа вспышек ГП не толь ко среди птиц, но и млекопитающих, включая человека. Особую обеспокоенность у научного сообщества вызвала вспышка высокопатогенного вируса гриппа птиц (ВПГП) подтипа H5N1 среди КРС в США, зарегистрированная в феврале 2024 г. С начала нотификации общее число инфицированных животных превысило 80 гол. В данной ситуации потенциальную угрозу для здоровья людей создает наличие вируса в высоких концентрациях в коровьем молоке. Исследование проведено в 2024 г. Для описания эпизоотической картины вируса ГП использованы данные о вспышках ВПГП из Всемирной системы информации о здоровье животных. Проведены лабораторные исследования с использованием коммерческих наборов, предназначенных для экстракции РНК из биологического материала на основе сорбции нуклеиновых кислот на поверхности силикагеля и магнитной сепарации, доступных на российском рынке. Эффективность выделения РНК оценивали методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) в режиме реального времени. Данные эпизоотической ситуации по ГП свидетельствуют о необходимости тщательного мониторинга распространения вируса среди птиц и млекопитающих. Несмотря на низкий риск выявления гриппа А среди КРС в России, необходимо поддерживать высокий уровень готовности к проведению диагностических исследований. Для исследования молока на ГП оптимальный результат показал коммерческий набор для выделения РНК на основе магнитной сорбции с последующей обратной транскрипцией коммерческим набором «РЕВЕРТА-L» и ПЦР в режиме реального времени по протоколу FLI, Германия (Институт Фридриха Лёффлера).

1. Szablewski C.M., Iwamoto C., Olsen S.J., Greene C.M., Duca L.M., Davis C.T., Cog geshall K.C., Davis W.W., Emukule G.O., Gould P.L., Fry A.M., Wentworth D.E., Du gan V.G., Kile J.C., Azziz-Baumgartner E. Reported Global Avian Influenza Detections Among Humans and Animals During 2013 2022: Comprehensive Review and Analysis of Available Surveillance Data // JMIR Public Health Surveill. 2023. Aug 31. N 9. e46383. DOI: 10.2196/46383.

2. Захарова О.И., Бурова О.А., Торопова Н.Н., Яшин И.В., Блохин А.А. Высокопатогенный грипп птиц в мире: стратегии вакцинации (обзор) // Аграрная наука Евро-Северо-Востока. 2022. № 23 (3). С. 295–306. DOI: 10.30766/2072-9081.2022.23.3.295-306.

3. Adlhoch C., Fusaro A., Gonzales J.L., Kui- ken T., Mirinavičiūtė G., Niqueux É., Ståhl K., Staubach C., Terregino C., Willgert K., Baldi nelli F., Chuzhakina K., Delacourt R., Georga nas A., Georgiev M., Kohnle L. Avian influenza overview September-December 2023 // EFSA Journal. 2023. Dec 19. N 21(12). e8539. DOI: 10.2903/j.efsa.2023.8539.

4. Burrough E.R., Magstadt D.R., Petersen B., Tim mermans S.J., Gauger P.C., Zhang J., Siepker C., Mainenti M., Li G., Thompson A.C., Gorden P.J., Plummer P.J., Main R. Highly Pathogenic Avian Influenza A(H5N1) Clade 2.3.4.4b Virus Infec tion in Domestic Dairy Cattle and Cats, United States, 2024 // Emerging Infectious Diseases. 2024. Jul; 30 (7), pp. 1335–1343. DOI: 10.3201/eid3007.240508.

5. Caserta L.C., Frye E.A., Butt S.L., Laverack M., Nooruzzaman M., Covaleda L.M., Thomp son A.C., Prarat Koscielny M., Cronk B., John son A., Kleinhenz K., Edwards E.E., Gomez G., Hitchener G., Martins M., Kapczynski D.R., Su arez D.L., Ruth E., Morris A., Hensley T., Bee by J.S., Lejeune M., Swinford A.K., Elvinger F., Dimitrov K.M., Diel D.G. From birds to mammals: spillover of highly pathogenic avian influenza H5N1 virus to dairy 2 cattle led to efficient intra- and interspecies transmission // BioRxiv [Pre print]. 2024. DOI: 10.1101/2024.05.22.595317.

6. Le Sage V., Campbell A.J., Reed D.S., Duprex W.P., Lakdawala S.S. Influenza H5N1 and H1N1 viruses remain infectious in un pasteurized milk on milking machinery surfa- ces // MedRxiv [Preprint]. 2024. N 22. DOI: 10.1101/2024.05.22.24307745.

7. Mace J.L., Knight A. Influenza risks arising from mixed intensive pig and poultry farms, with a spotlight on the United Kingdom // Frontiers in Veterinary Science. 2023. N 10. DOI: 10.3389/fvets.2023.1310303.

8. Марченко В.Ю., Гончарова Н.И., Гаврилова Е.В., Максютов Р.А., Рыжиков А.Б. Обзор эпизоотологической ситуации по высокопатогенному гриппу птиц в России в 2020 г. // Проблемы особо опасных инфекций. 2021. № 2. С. 33–40. DOI: 10.21055/0370-1069-2021-2-33-40.

9. Sauca Sunia Widyantari A.A.A., Kurniawan F.R. Identification of Avian Influenza with the Re al-Time Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) Method // Journal of Pharmaceutical and Health Research. 2023. N 4 (2), pp. 258–264. DOI: 10.47065/jharma.v4i2.3399.

10. Blagodatski A., Trutneva K., Glazova O., Mitya- eva O., Shevkova L., Kegeles E., Onyanov N., Fede K., Maznina A., Khavina E., Yeo S.J., Park H., Volchkov P. Avian Influenza in Wild Birds and Poultry: Dissemination Pathways, Monitoring Methods, and Virus Ecology // Pathogens. 2021. N 10 (5). P. 630. DOI: 10.3390/pathogens10050630.

11. Guo F., Li Y., Yu S., Liu L., Luo T., Pu Z., Xiang D., Shen X., Irwin D.M., Liao M., Shen Y. Adaptive Evolution of Human-Isolated H5Nx Avian Influenza A Viruses // Frontiers in Mi crobiology. 2019. N 10. P. 1328. DOI: 10.3389/fmicb.2019.01328.

12. Pulit-Penaloza J.A., Brock N., Belser J.A., Sun X., Pappas C., Kieran T.J., Basu Thakur P., Zeng H,. Cui D., Frederick J., Fasce R., Tumpey T.M., Maines T.R. Highly pathogenic avian influenza A(H5N1) virus of clade 2.3.4.4b isolated from a human case in Chile causes fatal disease and trans mits between co-housed ferrets // Emerging Mi crobes & Infections. 2024. N 13 (1). P. 2332667. DOI: 10.1080/22221751.2024.2332667.

13. Müller I., Althof N., Hoffmann B., Klaus C., Schilling-Loeffler K., Falkenhagen A., Johne R. Comparison of Extraction Methods for the De tection of Tick-Borne Encephalitis Virus RNA in Goat Raw Milk and Cream Cheese // Food and Environmental Virology. 2023. N 15 (1) P. 32 42. DOI: 10.1007/s12560-022-09535-y.

14. Wijenayake S., Eisha S., Tawhidi Z., Pitino M.A., Steele M.A., Fleming A.S., McGowan P.O. Comparison of methods for pre-processing, exosome isolation, and RNA extraction in unpasteurized bovine and human milk // Journal Public Library of Science. 2021. N 16 (9). P. 0257633. DOI: 10.1371/journal.pone.0257633.

15. Тихвинский М.С., Воробьев А.А., Кибирев Я.А., Усенко Г.С., Козлов А.И., Исупов С.Г. Современные подходы к решению задач по подготовке проб к анализу методом полимеразной цепной реакции // Вестник войск РХБ защиты. 2021. № 5 (3). С. 236–246. DOI: 10.35825/2587-5728-2021-5-3-236-246.