Совершенствование культивирования и выявление чувствительности к антибактериальным препаратам у культур Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis

Разработана плотная питательная среда для культивирования возбудителя паратуберкулеза с ингредиентами природного происхождения – вытяжки из золы древесины березы и оксидата торфа. Изучена возможность ее применения для фенотипического выявления чувствительности микобактерий паратуберкулеза к антибактериальным препаратам. Аналогом для изготовления опытной среды служила коммерческая питательная среда Левенштейна-Йенсена с микобактином. Анализ состава вытяжки из золы древесины березы и оксидата торфа показал наличие в них микро- и макроэлементов, необходимых для жизнедеятельности микобактерий. При посеве биоматериала от крупного рогатого скота, имеющего патологические изменения, характерные для паратуберкулеза, на опытной и коммерческой питательной среде Левенштейна-Йенсена с микобактином изолировано по три культуры микобактерий. Интенсивность роста культур на опытной среде составила +(1), на коммерческой – +/–(0). На основании микробиологических исследований полученные изоляты отнесены к M. paratuberculosis. При культивировании суспензий стандартизированного штамма M. paratuberculosis и выделенных изолятов появление первичного роста колоний на опытной питательной среде отмечали на 3 ± 0,42 сут быстрее, чем на коммерческой, интенсивного – на 7 ± 0,30 сут. При посеве биоматериала первичный рост из него микобактерий, идентифицированных как M. paratuberculosis, на опытной среде отмечен в среднем на 7 ± 0,1 сут быстрее, чем на коммерческой, интенсивный – на 3 ± 0,62 сут. Фенотипическое определение диско-диффузионным методом чувствительности штамма и изолятов к 11 антибактериальным препаратам выявило их восприимчивость ко всем использованным антибиотикам и показало отсутствие статистически значимых различий между зонами подавления роста на коммерческой и опытной питательных средах. Установлено, что опытная питательная среда обладает диагностической эффективностью и информативностью с возможностью использования ее при фенотипическом выявлении чувствительности культур микобактерий паратуберкулеза к антибактериальным препаратам, при этом она дешевле и проще в приготовлении. 

1. Pickrodt C., Donat K., Moog U., Köhler H. Analysis of colostrum and udder skin swabs from a dairy goat herd in Germany regarding the occurrence of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis // Animals (Basel). 2022. N 12. P. 17–79. DOI: 10.3390/ani12141779.

2. Alonso-Hearn M., Ballesteros A., Navarro A., Badia-Bringué G., Casais R. Lateral-flow assays for bovine paratuberculosis diagnosis // Frontiers in Veterinary Science. 2023. N 10. P. 1257– 1488. DOI: 10.3389/fvets.2023.1257488.

3. Hruska K., Sechi L.A. Long history of queries about bovine paratuberculosis as a risk factor for human health // Pathogens. 2021. N 10. P. 13– 94. DOI: 10.3390/pathogens10111394.

4. McAloon C.G., Roche S., Ritter C., Barkema H.W., Whyte P., More S.J., O'Grady L., Green M.J., Doherty M.L. A review of paratuberculosis in dairy herds Part 1 // Epidemiology Veterinary Journal. 2019. Vol. 246. P. 59–65. DOI: 10.1016/j.tvjl.2019.01.010.

5. Паратуберкулез (Реферативный обзор литературы и действующего законодательства) // Вестник ветеринарии. 2024. № 2 (109). С. 42–46.

6. Дифференциальная диагностика болезней сельскохозяйственных животных: монография / Ятусевич А.И., Красочко П.А., Максимович В.В. и др. Краснодар: Издательство Кубанского государственного аграрного университета им. И.Т. Трубилина, 2021. 808 с.

7. Cechova M., Beinhauerova M., Babak V., Slana I., Kralik P. A Novel approach to the viability determination of Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis using platinum compounds in combination with quantitative PCR // Frontiers Microbiology. 2021. Vol. 12. P. 74–83. DOI: 10.3389/fmicb.2021.748337.

8. Bonnet M., Lagier J.C., Raoult D., Khelaifia S. Bacterial culture through selective and nonselective conditions: the evolution of culture media in clinical microbiology // New Microbes and New Infections. 2020. Vol. 34. P. 1006– 1022. DOI: 10.1016/j.nmni.2019.100622.

9. Marquetoux N., Ridler A., Heuer C., Wilson P. What counts? A review of in vitro methods for the enumeration of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis // Veterinary Microbiology. 2019. Vol. 230. P. 265–272. DOI: 10.1016/j. vetmic.2019.02.011.

10. Фазылов В.Х., Петров И.В., Петрова Л.В., Петрова Ф.С., Амирова Т.Х. Проблемы лабораторной диагностики и идентификации видов микобактерий // Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. 2021. Т. 10. № 3. С. 118–126.

11. Хронические инфекции животных. Паратуберкулез: монография / А.Х. Найманов, Е.П. Вангели, Ю.М. Мясоедов и др. М.: Издательство «Спутник», 2022. 125 с.

12. Alonso M.N., Garcia V.S., Moyano R.D., Romero M.A., Gugliotta L.M., Travería G.E., Romano M.I., Gonzalez V.D.G. New and rapid strategies for the diagnosis of bovine paratuberculosis "in situ" using latex particles // Journal of Immunological Methods. 2021. Vol. 496. P. 1130– 1185. DOI: 10.1016/j.jim.2021.113085.

13. Ионина С.В., Донченко А.С. Использование стимуляторов роста природного происхождения при культивировании микобактерий туберкулеза // Ветеринария и кормление. 2024. № 3. С. 61–64.

14. Ионина С.В. Микробиологические особенности и антибиотикочувствительность культур Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP), выделенных на территории Западной Сибири // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2023. Т. 53. № 12. С. 97–103. DOI: 10.26898/0370-8799-2023-12-11.

15. Ионина С.В. Культивирование микобактерий паратуберкулеза // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2019. Т. 49. № 2. С. 64–69. DOI: 10.26898/0370-8799-2019-2-8.